생리학실험 구강상피로부터 유전자의 추출 (DNA extraction kit) 실험 보고서

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오늘은 해피캠퍼스에서 발췌한 “생리학실험 구강상피로부터 유전자의 추출 (DNA extraction kit) 실험 보고서” 내용을 정리하여 알려드립니다.

 

목차

1. Introduction

2. Materials and Apparaturs

3-1 Methods for DNA Extraction
3-2 Methods for PCR

4. Discussion
4-1 DNA extraction 과정 중의 buffer의 역할
4-2 대조군의 조건 설정 이유

5. Reference

 

본문내용일부

1. Introduction
생명체가 살아가는데 필요한 정보를 담고 있는 DNA를 연구하기 위해 기초가 되는 DNA를 얻는 방법에 대해 실험을 하게 되었다.
DNA Extraction에서 PCR 단계까지 진행하였다. 단순히 주어지는 Protocol에 따라, 실험을 진행하였으나, 이번 보고서를 통해 DNA Extraction에서의 각 단계가 가지는 의미는 무엇인지, 해당 용액의 역할은 무엇인지에 대해 자세히 알아보았다.

2. Materials and Apparaturs
면봉, Tube Rack, 1000㎕, 100㎕, 10㎕ pipet & tip, centrifuge, 1.5㎖ tube(E-tube), beaker, namepen, Distilled Water, DNA extraction KIT(GL/GB/WA/WB Buffer, proteinase K, RNase A, spin column, collection tube), 100% EtOH, 70% EtOH, WipeAll

3-1 Methods for DNA Extraction
1. 면봉을 이용하여 구강상피세포를 채취한 후 1mL의 1xPBS가 든 1.5㎖ tube (e-tube)에 충분히 푼다.
2. 10분간 8000rpm로 centrifuge한다.
3. 상층액을 따라 버린 후 1.5㎖ tube에 200㎕의 GL-buffer를 넣은 후 pipetting한다.
4. Proteinase K 20㎕, RNase A 10㎕를 넣어준 후 20초간 vortexing한다.
5. 56℃로 맞춘 heat block에서 10분간 둔다.
6. 200㎕의 GB buffer를 첨가한 후 pipetting한다.
7. 6번 까지 진행한 1.5㎖ tube의 내용물을 모두 Spin Colum으로 옮긴 후, 12000rpm으로 1분간 centrifuge한다.
8. Centrifuge 이후 collection tube의 물질은 버리고, Spin Colum 내 500㎕의 WA buffer를 넣고, 12000rpm으로 1분간 centrifuge한다.

 

참고문헌

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Liu, Shu-Qun, et al. "The effect of calciums on molecular motions of proteinase K." Journal of molecular modeling 17.2 (2011): 289-300.
Lione, A., & Padgett, G. B. (1995). Reproductive effects of chemical, physical, and biologic agents: Reprotox. Johns Hopkins University Press.

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