SDS-PAGE & Western Blot 결과 레포트

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오늘은 해피캠퍼스에서 발췌한 “SDS-PAGE & Western Blot 결과 레포트” 내용을 정리하여 알려드립니다.

목차

1. 실험목적

2. 실험원리

3. 실험재료 및 방법
1) 실험재료
2) 실험기기 및 장비
3) 실험방법

4. 결과

5. 고찰

6. 참고문헌

 

본문내용일부

1)단백질 전기 영동의 types
Gel types에 따라 2D-electrophoresis using Rod gel와 Slab gel로 나뉜다. Rod gel은 2D-electrophoresis를 할 때 사용되는데, 단백질을 pI와 분자량에 따라 분리하는 방식이다. 1차원 전기 영동에서 단백질은 rod gel에서 pI에 따라 분리된 후 SDS polyacrylamide gel에서 2차원 전기 영동으로 분자량에 따라 분리된다. 다음으로, Non-dissociating buffer system와 Dissociating buffer system로 구분할 수 있다. Non-dissociating buffer system는 Native-PAGE, Dissociating buffer system은 SDS-PAGE를 사용한다. Native-PAGE는 SDS를 사용하지 않기 때문에 denaturing을 일으키지 않아 folding도 분리에 영향을 미친다는 점에서 오로지 크기로 분리하는 SDS-PAGE와는 차이가 있다. 따라서 Native-PAGE는 단백질 간의 binding을 분석하는 등 단백질 구조가 중요한 실험에서 사용한다. 또한, Continuous system와 Discontinuous system로 구분할 수 있다. Discontinuous system은 단백질이 같은 선상에 위치할 수 있도록 하는 Stacking gel이 있고 그 아래에 Running gel이 있다. pH가 다른 두 gel이 있다는 특징이 있고 Continuous system는 이와 다르게 하나의 gel이 존재한다. 한 종류의 gel이기 때문에 빠를 수 있지만 sample volume이 각각 달라서 완전히 동일선상에서 출발하지 않는다는 특징이 있다. 이 실험에서는 Slab gel, Dissociating buffer system, Discontinuous system을 이용하므로 SDS-discontinuous polyacrylamide gel electrophoresis를 진행한다.

*전기 영동법 종류
A.비환원 SDS-PAGE
S-S 결합을 절단하고 싶지 않을 경우 환원제인 2-Mercaptoethanol을 넣지 않고 할 수 있다. 이 경우 원칙적으로 분자량 순에 따르지만, 이황화 결합으로 oligomer 되어 있는 경우 oligomer 분자량에 따라 나타난다. 하나의 gel에 환원제가 들어있는 sample과 들어있지 않은 sample을 함께 loading하는 것은 피해야 한다. 환원제가 확산할 가능성이 있고 흐트러질 수 있게 때문이다.

 

참고문헌

김태전 외2, 2004, 세포배양학개론, p. 205, 고려의학.
김승호 외1, 2006, 단백질실험노트(하) 제3판, pp. 17-18, 22, 24, 29-31, 40-41, 44, 47, 51, 월드사이언스.

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