[화공생물공학실험] DNA 제한효소 실험 예비레포트

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오늘은 해피캠퍼스에서 발췌한 “[화공생물공학실험] DNA 제한효소 실험 예비레포트” 내용을 정리하여 알려드립니다.

 

목차

1. 실험 목표

2. 실험 원리
1) 생물정보학(Bioinformatics)
2) 제한효소(Restriction enzyme)
(1) I형 제한효소
(2) II형 제한효소
(3) III형 제한효소
3) 전기영동(Electrophoresis)
(1) 아가로스 겔 전기영동(Agarose gel electrophoresis)
(2) Electrophoresis Buffer
(3) DNA staining dye

3. 시약 조사 & 실험 기구 및 방법
1) 실험 기구
2) 실험 시약
3) 실험 방법

4. 실험 시 주의사항

5. 참고 문헌

 

본문내용일부

실험 목표
lambda DNA 를 임의의 제한효소를 사용해 절단하고, 이를 전기영동하여 사용된 제한 효소의 기작과 DNA의 대략적인 구조를 알아본다.

<중 략>

실험 방법
(1) 1.5mL micro tube 에 아래와 같이 sample을 제조한다.
① Lambda DNA 5μl + DW 13μl + 10x Restriction Enzyme buffer 2μl
② Lambda DNA 5μl + DW 12μl + 10x Restriction Enzyme buffer 2μl + Restriction Enzyme1 1μl
③ Lambda DNA 5μl + DW 12μl + 10x Restriction Enzyme buffer 2μl + Restriction Enzyme2 1μl
④ Lambda DNA 5μl + DW 12μl + 10x Restriction Enzyme buffer 2μl + Restriction Enzyme1 1μl + Restriction Enzyme2 1μl
(2) Micro tube 를 모두 37℃에서 반응시킨다.
(3) DW 49.8ml + 50x TAE buffer 0.02ml 를 dilution 하여 1x TAE buffer 50ml 를 제조한다.
(4) Agarose 1%(w/v)이 되도록 0.5g을 넣어 전체 부피가 50ml인 1x TAE buffer를 제조한다.
(5) 뚜껑을 살짝 닫은 후 agarose가 완전히 녹을 때까지 전자레인지로 가열한다.
(6) 상온에서 식힌 후, 20000x Redsafe를2.5μl 첨가하여 1x가 되도록 용액을 제조한다.
(7) Comb 가 꽂혀진 틀에 agarose를 천천히 붓고 굳을 때까지 기다린다.
(8) 각각의 sample에 6x loading buffer 를 4μl 첨가하여 1x가 되도록 만든다.
(9) 전기영동기에 gel이 잠길 정도로 1x TAE buffer를 넣어준다.
(10) Agarose gel well 에 DNA marker 3μl와 각각의 sample 5μl를 loading한다.
(11) 전기영동기 스위치를 누른 후 gel의 3/4 정도에 Orange G가 오면 멈추고 gel을 UV-transi lluminator 로 관찰한다.
(12) 각각의 결과를 Ape 프로그램을 통해 분석한 후 사용한 제한효소의 종류와 lambda DNA의 구조를 파악한다.

 

참고문헌

화공생물공학과 교수진. (2023). 화공생물공학실험. 동국대학교 화공생물공학과. 5-8.
박성환. (2022). 아가로스 겔 전기영동에서 간단하고 실용적인 DNA 염색 방법. 산업기술연구논문지, 27(4), 1-7.
윤용덕, & 주이석. (1993). 역전장 전기영동장치를 이용한 대형 DNA 분리에 관한 연구. 대한수의학회지, 33(1), 81-85.
GS, S. Advanced DNA Sequencing Technology.
안전보건공단. http://msds.kosha.or.kr/MSDSInfo/

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